玻璃層析柱基于分子化合物在不同化學(xué)環(huán)境下具有不同的親和性原理,通過將待分離物質(zhì)注入柱內(nèi),利用分子之間的相互作用分離和分析分子化合物。
通常情況下,內(nèi)部填充有一種或多種分離介質(zhì),例如硅膠、聚丙烯酰胺凝膠、離子交換樹脂及其它化學(xué)試劑。這些介質(zhì)不同于色譜柱中的針孔層析,
其內(nèi)部存在大小不一的孔隙和通道,維持著一個(gè)復(fù)雜的多相反應(yīng)體系的存在。
介質(zhì)通過表面有官能團(tuán)進(jìn)行函數(shù)化修飾,構(gòu)成有反相、離子交換等特定功能的層析介質(zhì)。當(dāng)樣品被投放到層析柱中,不同的分子之間會發(fā)生一系列的親和性和排斥性反應(yīng),在分子大小、相對極性等相互作用加持下分離出不同分子化合物,達(dá)到分析和純化的目的。
玻璃層析柱具有以下優(yōu)點(diǎn):
1.適用范圍廣:可以對多種分子化合物進(jìn)行分離和分析,覆蓋了生命科學(xué)、醫(yī)藥、環(huán)保等領(lǐng)域中眾多化合物。
2.實(shí)驗(yàn)簡單、易于操作:僅需少量的材料比色譜柱更易于掌握。
3.顯著的經(jīng)濟(jì)性:成本相較同類型的離子交換色譜柱低廉,容易獲得。
玻璃層析柱的使用注意事項(xiàng):
1.適當(dāng)選擇適合自己的層析柱,樣品的來源、性質(zhì)、分子量、配制溶液等都需要考慮。
2.操作前應(yīng)該檢查樣品的純度、含量以及顏色和形態(tài),避免污染和混合。
3.選擇合適的溶液和流量,調(diào)整凝膠和樣品的pH,慢慢地加入溶液,讓溶液流經(jīng)層析柱。
4.注意控制層析柱內(nèi)流速,在實(shí)驗(yàn)開始前一定要檢查好流速,如果忽視這個(gè)點(diǎn),就會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生不良的影響。
5.注意安全,在操作過程中要小心,要避免玻璃柱斷裂等現(xiàn)象發(fā)生。